Panoramica di Immunodiagnosis
1. Concetto di base
(1) anticorpi (Ab) e antigens (Ag)
Anticorpo: Si riferisce alla protezione proteina prodotta dal corpo a causa di antigene stimolazione, secreta da effector B celle in vertebrati, che può essere diviso in IgG, IgM, IgA, igD, e IgE. IgG è il isotype con il più alto contenuto nel siero e fluidi corporei, che rappresentano per 75% a 80%. Anticorpi IgG è il primario prodotto dalla risposta immunitaria secondaria, la "forza principale" del corpo di anti-infezione, E il più utilizzato anticorpo in immunodiagnosis.
Antigene: si riferisce a una sostanza che può causare la produzione di anticorpi e tutte le sostanze che possono indurre un immunitario risposta nel corpo. Antigens sono stranieri, macromolecolare, e specifico. La specificità di un antigene significa che un antigene può solo legarsi al corrispondente anticorpi o effector cellule T, che gruppi di determinare sulla superficie delle molecola chimica, chiamato antigenic determinanti. Il peso molecolare del antigene è generalmente> 10kDa, e il più grande il peso molecolare, il più forte è la antigenicity.
(2) Polyclonal anticorpi e anticorpi monoclonali
Polyclonal anticorpo: le molecole di antigene spesso contengono una varietà di differenti antigenic naturale epitopes, stimolare il sistema immunitario del corpo con questo antigene può attivare una varietà di cellule B cloni allo stesso tempo, E la conseguente anticorpi contiene una varietà di anticorpi contro diversi epitopes, in modo che sono chiamati polyclonal anticorpi.
Il monoclonali anticorpi è altamente omogenea anticorpo prodotto da un singolo cellule B clone che solo gli obiettivi di una specifica epitopo. È in genere preparato utilizzando la tecnologia hybridoma. Effector B le cellule e mieloma le cellule sono fusi per formare cellule B hybridomas. UN monoclonali anticorpi in grado di produrre da coltura un singolo hybridoma cellulare in una popolazione di cellule specifico per un epitopo. Il affinità e specificità di anticorpi monoclonali sono generalmente meglio di quelli di polyclonal anticorpi.
(3) ricombinante anticorpi e ricombinante antigens
Ricombinante anticorpo: UN geneticamente modificato anticorpo è un anticorpo prodotto in vitro utilizzando gene tecnologia di ricombinazione e proteine tecnologia di ingegneria. Ottenere il gene la sequenza del anticorpo, costruire una espressione di vettore, E di trasferimento in una espressione host (ad esempio come lievito di birra, insetto le cellule, le cellule di mammiferi, O batteri). In questo modo, la produzione di anticorpi è liberato da i vincoli del sistema immunitario. Allo stesso tempo, sia full-lunghezza anticorpi e vari frammenti di anticorpi in grado di produrre.
Ricombinante antigens: In Generale, il ricombinante antigens fare riferimento a proteine proteine ricombinanti, in sostanza, e sono anche prodotta in vitro di gene ricombinazione tecnologia E proteine tecnologia di ingegneria.
2. I principi di immunodiagnosis
(1) metodo di doppio monoclonali anticorpi panino
Doppio monoclonali anticorpi panino metodo: utilizzare una fase solida al vettore di cappotto di un anticorpo e etichetta un altro etichettato anticorpo per rilevare la antigene per essere testato, E quindi formare un complesso di rivestito Ab-Ag-etichettato Ab. Questo metodo principalmente rileva antigenic sostanze.
Immagine di credito: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(2) metodo indiretto
Metodo indiretto: un metodo di rilevazione in cui un solido-fase vettore è utilizzato per immobilizzare il antigene e etichetta secondario anticorpo. Questo metodo è utilizzato principalmente per rilevare anticorpi in campioni di IgG. UN complesso di rivestito Ag-target Ab-etichettato secondario Ab è formata per rilevare la anticorpo in il campione.
Immagine di credito: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(3) metodo di acquisizione
Metodo di acquisizione: un metodo di rilevazione in cui un solido-fase vettore è utilizzato per rivestire la anticorpo secondario e un altro ceppo di etichettati antigene per rilevare la anticorpo. UN complesso di rivestito secondaria Ab-target Ab-etichettato Ag è formato e testato. Questo metodo è utilizzato principalmente per rilevare IgM nel campione.
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(4) metodo di concorrenza
Concorrenza metodo: competitivo vincolante di rivestito/etichettati anticorpo con la etichettato/rivestito di antigene e il test dell'antigene. Questo metodo è utilizzato principalmente per rilevare minori molecola antigens.
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Metodo 1: cappotto il anticorpo sulla fase solida, etichetta il antigene, aggiungere il campione, il antigene per essere testato compete per il anticorpo sito di legame, lavare, uscita il risultato
Metodo 2: cappotto il antigene sulla fase solida, etichetta il anticorpo
3. Lo sviluppo di immunodiagnosis
Immunodiagnosis si applica immunologia teorie, tecniche, e mezzi per diagnosticare varie malattie e determinare lo stato immunitario. Con la tecnologia di sviluppo, immunodiagnosis è stato sottoposto a immunoelectrophoresis, le precipitazioni e agglutinazione saggi, radioimmunoassay, immunofluorescence, enzima-linked immunosorbent assay, immunoturbidimetry, colloidale oro e fluorescente microsphere etichettatura, assorbente membrana strisce, chemiluminescence, proteine chip, microfluidica tecnologia di controllo e single-molecola di rilevamento.
(1) Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
Enzima-linked immunosorbent assay (ELISA) È un metodo di rilevazione che combina il sistema immunitario principio di reazione con la tecnologia di immobilizzazione e enzima etichettatura tecnologia. In primo luogo, utilizzare un polistirolo multi-bene piastra per rivestire la antigene/anticorpo, bind la sostanza per essere testato in il campione, e aggiungere rafano perossidasi (HRP) O alcalina phosphatase (AP) dopo il lavaggio per etichettare il anticorpo/antigene per formare un immunitario complesso. Quindi aggiungere un enzimatica substrato cromogenico e una soluzione di arresto per terminare la reazione. Infine, qualitativamente o quantitativamente determinare il campione contenuto analita da il colore OD.
Immagine di credito: https://www.biotekchina.com.cn/applicazioni/elisa-and-related-immunoassays.html
(2) colloidale oro/fluorescenza immunochromatography
Colloidale oro: fare riferimento alla oro sol con il diametro delle particelle di fase dispersa tra 1 e 150 nm, E il colore è di colore arancione-rosso al viola-rosso.
Colloidale oro immunochromatography: una tecnica di rilevamento che utilizza colloidale oro-etichettato anticorpo, uso nitrocellulosa membrana (NC membrana) come una fase solida al vettore di cappotto antigene/anticorpo, E utilizza il capillare azione di NC membrana per cromatografo il liquido da un capo all'altro della membrana per l'altra estremità, allo stesso tempo, Una reazione immunitaria si verifica durante il cromatografia.
Fluorescenza immunochromatography: un immunochromatographic tecnologia di rilevamento altera la colloidale oro in fluorescente microsphere etichettatura.
Immagine di credito: https://www.researchgate.net/figure/A-The-composition-of-colloidal-gold-test-strip-B-Principle-of-the-CG-test-strip_fig5_340176469
(3) Chemiluminescence immunoassay
Chemiluminescence: si riferisce al emissione di luce che accompagna il processo di reazioni chimiche.
Chemiluminescence immunoassay metodo: una tecnica di rilevamento che utilizza multi-piastra di bene o particelle magnetiche come solido vettori a cappotto antigene/anticorpo, aggiungere analiti e luminophore per etichetta antigene/anticorpo per formare un immunitario complesso, dopo il lavaggio, chimicamente stimolare il complesso o substrato per emettere luce, E determina il contenuto di l'analita da la luminescenza intensità.
Immagine di credito: https://www.sepmag.eu/blog/offerta/335317/la-due-key-motivi-per-la selezione-chemiluminescence-per-immunoassays
(4) classificazione di chemiluminescence immunoassay
Classificazione da rivestimento carrier: Si è diviso in piastra chemiluminescence e di particelle magnetiche chemiluminescence. Allo stato attuale, piastra chemiluminescence è stato eliminato.
Classificazione da luminescenza: diviso in indiretta luminescenza (enzimatica), diretta luminescenza (acridina estere, luminol), e electrochemiluminescence.
